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細(xì)胞培育室

作者:admin 出處:科瓦特發(fā)表時(shí)間:2021-01-11 08:47:34
 

細(xì)胞培育室簡介
  細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室是微生物實(shí)驗(yàn)室里面的配套實(shí)驗(yàn)室,細(xì)菌培養(yǎng)室用人工方法(使其在合適的溫度,濕度,光照度,PH值,潔凈度等環(huán)境下,使細(xì)菌生長繁殖,培養(yǎng)出來的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。廣泛用于醫(yī)藥研究。
室內(nèi)要求無菌操縱,要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響.細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔,空氣清新,干燥和無煙塵.細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操縱區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),常規(guī)操縱和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室. 與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)包括配液室、準(zhǔn)備室和培養(yǎng)室。三室既相互連接又相對獨(dú)立,各自完成培養(yǎng)過程中的不同操作。

細(xì)胞培育室

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室可培育的細(xì)胞種類
  干細(xì)胞培養(yǎng)
•腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng) <>
 • 上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng) <>
 • 內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng) <>
 • 神經(jīng)原細(xì)胞原代培養(yǎng) <>
 • 肌組織原代培養(yǎng) <>
 • 巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng) <>
 • 293細(xì)胞培養(yǎng) <>
 • 細(xì)胞的冷凍保存和解凍培養(yǎng) <>
 • 小鼠胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng) <>
 • 小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDC)的培養(yǎng)<>
 • 肺泡II型細(xì)胞分離培養(yǎng) <>         
 • 肝枯否細(xì)胞分離培養(yǎng) <>
 • 原代軟骨細(xì)胞分離培養(yǎng) <>
 • 心肌細(xì)胞分離培養(yǎng) <>
• 細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)
備注:細(xì)胞培育室包括以上細(xì)胞品類,但不限于以上種類:

胞培養(yǎng)室的溫度
    維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同.人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,甚至死亡.培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全部死亡.相反,溫度不低于0℃時(shí),對細(xì)胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細(xì)胞放進(jìn)25-35℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時(shí)后,再回到37℃培養(yǎng),細(xì)胞仍能繼續(xù)生長.細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢.當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡.但是,假如向培養(yǎng)液中加進(jìn)一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存.
 細(xì)胞培養(yǎng)室合適的氣體環(huán)境
    氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必須條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳.氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分.開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中.二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值.大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響.但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長.但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,如成纖維細(xì)胞最適合pH是7.4-7.6.每種細(xì)胞都有其最適pH值.
 
細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
細(xì)胞培育室整體布局圖

植物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置
 1.基本實(shí)驗(yàn)室
1.1 洗滌間   
 根據(jù)工作量的大小決定其大小,一般面積控制在30-50m2。在實(shí)驗(yàn)室的一側(cè)設(shè)置專用的洗滌水槽,用來清洗玻璃器皿。中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)還應(yīng)配置2個(gè)水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以購置一臺(tái)洗瓶機(jī)。準(zhǔn)備1-2個(gè)洗液缸,專門用于洗滌對潔凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應(yīng)配置落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等。   地面應(yīng)耐濕并排水良好。 
 
1.2培養(yǎng)基配制間
        面積60平方米左右,配備的主要儀器設(shè)備有 :冰箱、天平、微波爐、pH計(jì)、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲(chǔ)藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜,用于儲(chǔ)存培養(yǎng)基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、及保存植物材料。天平應(yīng)有不同感量。 
 
1.3消毒間
      配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、高壓滅菌鍋、排風(fēng)滅火設(shè)備、細(xì)菌過濾設(shè)備、干熱消毒柜、電爐等。 滅菌鍋的選擇應(yīng)根據(jù)不同的要求選擇不同型號(hào)的滅菌鍋。一般實(shí)驗(yàn)室可選用小型的醫(yī)用手提式高壓滅菌鍋,較大的實(shí)驗(yàn)室可選用立式自動(dòng)控制壓力和溫度的滅菌鍋。生產(chǎn)性的實(shí)驗(yàn)室可選用大型的臥式滅菌鍋。 
    如果沒有條件的話,可以將上述工作間合并成一個(gè)準(zhǔn)備間,要求是設(shè)備的安裝和排列要合理、房間要寬敞、明亮、透風(fēng),地面要便于清潔、防滑。
 1.4無菌操作室
      無菌操作室主要用于實(shí)驗(yàn)材料的接種操作,所以又叫接種室。通常由里外兩間組成,外間是緩沖間,用于準(zhǔn)備工作,還有防止污染的作用。緩沖間的門應(yīng)該與接種室的門錯(cuò)開,兩個(gè)門也不要同時(shí)開啟,以保證無菌室不因開門和人的進(jìn)出帶進(jìn)雜菌。
    緩沖間內(nèi)應(yīng)該設(shè)有水槽、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內(nèi)壁應(yīng)當(dāng)用塑鋼板或瓷磚裝修,工作人員進(jìn)入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。 室內(nèi)應(yīng)配有超凈工作臺(tái),紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。
   1.5培養(yǎng)室
      為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度,培養(yǎng)室的房間不要窗戶,但應(yīng)當(dāng)留一個(gè)通氣窗,并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制,光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻***好用塑料鋼板裝修,地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè),一般要分兩間,一為光照培養(yǎng)室,一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。 
培養(yǎng)室應(yīng)配有培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動(dòng)控時(shí)器等。日光燈一般用40W,固定在培養(yǎng)架的側(cè)面或擱板的下面,每層有兩支日光燈,距離在20cm,光照強(qiáng)度為2000-3000lx。 2.輔助實(shí)驗(yàn)室  2.1鑒定室       
細(xì)胞學(xué)鑒定室  其功能是對培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。要求清潔、明亮、干燥,使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。應(yīng)配置各種顯微鏡、照相系統(tǒng)等。    生化分析室在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中,應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,以便于對培養(yǎng)物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。 離心機(jī)、酶聯(lián)免疫檢測儀、天平、PCR儀等。 2.2、溫 室 用于試管苗的鍛煉和移植,為試管苗提供滿足生長的適宜環(huán)境條件。 常用設(shè)備有:溫室 、彌霧裝置、蔭棚、移栽床、缽、盆、基質(zhì)等. 

細(xì)胞培育室走廊

                               普通細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)走廊

細(xì)胞培育室工作區(qū)
                                           普通細(xì)胞培養(yǎng)室一角
萬級(jí)層流細(xì)胞培育室
                                         萬級(jí)層流細(xì)胞培養(yǎng)室
 
 2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置
無菌條件:凈化工作室,風(fēng)淋室,傳遞窗,高效過濾器,潔凈層流罩,生物安全柜,超凈工作臺(tái),紫外燈,電熱干燥箱,濾器,高壓滅菌器,抗生素。 
細(xì)胞生長條件:純水蒸餾器,純水儀,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶, CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)基,血清 細(xì)胞檢測條件:倒置顯微鏡,酶標(biāo)儀 ,微孔板震蕩器,高速離心機(jī),移液器 。
細(xì)胞保存條件:液氮罐 實(shí)驗(yàn)室  準(zhǔn)備間  緩沖間  培養(yǎng)室  。
實(shí)驗(yàn)室的要求
①和緩沖間相連,緩沖間內(nèi)備消毒服裝和鞋,口罩等,入內(nèi)換上 
②設(shè)置1—2臺(tái)超凈工作臺(tái) 
③室內(nèi)空氣不流通,有適當(dāng)?shù)墓饩€,清潔,干燥
 ④側(cè)部可設(shè)傳遞窗,用于物品傳遞 
⑤照明用熒光燈為好,消毒用紫外線燈 
⑥在室內(nèi)工作時(shí),動(dòng)作應(yīng)輕微
 
準(zhǔn)備間內(nèi)設(shè)備
①大、小水槽②消毒設(shè)備③消毒后的物品和器械保藏柜④烘箱
⑤蒸餾器(包括雙蒸,三重蒸餾水)⑥玻璃器皿,培養(yǎng)液等⑦電爐等 
注意: 
①配制溶液要用新鮮的純水,配制過程避免交叉感染
 ②設(shè)備排列緊湊 
③指定一處可暫放不污及有毒物質(zhì) 準(zhǔn)備間設(shè)備
CO2培養(yǎng)箱:37度+/-0.5度;能調(diào)節(jié)溫度和CO2濃度
 消毒器:高壓鍋,蒸汽滅菌鍋,干燥消毒箱 
冰箱:4度或-20度家用冰箱,保存一般制劑;-70度保存蛋白制劑 
水質(zhì)純化裝置:凈化水質(zhì)用于清洗或配制培養(yǎng)液 
另外:顯微鏡,離心機(jī),酸度計(jì),天平,液氮罐、真空泵等。
 
案例一
名稱:某生物學(xué)研究所植物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室
實(shí)驗(yàn)室面積:500m2的實(shí)驗(yàn)場地,
擁有1個(gè)層流的細(xì)胞操作間、2個(gè)普通培養(yǎng)操作間、1個(gè)無菌室、及配套實(shí)驗(yàn)室和洗滌消毒室、緩沖房。
  植物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面設(shè)計(jì)圖
案例二:
以下為某干細(xì)胞治療中心萬級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室建設(shè)方案
一、施工原則
1、)統(tǒng)一施工驗(yàn)收要求,做到保證工程質(zhì)量、節(jié)約能源、保護(hù)環(huán)境、安全操作。
2、)萬級(jí)潔凈室施工前必須按照設(shè)計(jì)圖紙施工,并且制定詳盡的施工方案和程序
3、)施工所用的所有材料、設(shè)備必須符合設(shè)計(jì)規(guī)定并有質(zhì)量鑒定文件。
 
二、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)依據(jù)
 
1、《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB-19489-2004
2、《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》GB50346-2004
3、《潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范》(GB50073-2001)
4、《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》(JGJ71-90)
5、《通風(fēng)與空調(diào)工程施工及驗(yàn)收規(guī)范》(GB50243-2000)
6、《采暖與空調(diào)調(diào)節(jié)設(shè)計(jì)規(guī)范》(GBJ114-88)
7、《建筑設(shè)計(jì)防火規(guī)范》(GBJ 16-87)
8、《低壓配電裝置及線路設(shè)計(jì)規(guī)范》(GBJ54-83)
三、萬級(jí)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室凈化通風(fēng)系統(tǒng)
萬級(jí)無菌實(shí)驗(yàn)室利用送、回風(fēng)量維持房間壓差;送風(fēng)經(jīng)初、中、高效過濾后送入室內(nèi)。(回風(fēng)比例為80%,新風(fēng)比例為20%)
3.3干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)
從保溫角度考慮實(shí)驗(yàn)室的圍護(hù)及吊頂結(jié)構(gòu)采用厚度為50mm的凈化實(shí)驗(yàn)室專用聚苯乙烯夾心復(fù)合彩鋼板(優(yōu)點(diǎn):機(jī)械強(qiáng)度高,隔熱、隔音、防潮性能好、平整光滑、耐腐蝕、易清潔、安裝方便)。頂棚及板壁的墻角處和墻與地面、墻與吊頂采用圓弧陰陽過渡并封閉。所有配套鋁合金型材均采用優(yōu)質(zhì)電泳型材,以防止實(shí)驗(yàn)室以后消毒時(shí)導(dǎo)致鋁材氧化。
3.2萬級(jí)干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室凈化通風(fēng)系統(tǒng)
萬級(jí)無菌實(shí)驗(yàn)室利用送、回風(fēng)量維持房間壓差;送風(fēng)經(jīng)初、中、高效過濾后送入室內(nèi)。(回風(fēng)比例為80%,新風(fēng)比例為20%)
3.3干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)
從保溫角度考慮實(shí)驗(yàn)室的圍護(hù)及吊頂結(jié)構(gòu)采用厚度為50mm的凈化實(shí)驗(yàn)室專用聚苯乙烯夾心復(fù)合彩鋼板(優(yōu)點(diǎn):機(jī)械強(qiáng)度高,隔熱、隔音、防潮性能好、平整光滑、耐腐蝕、易清潔、安裝方便)。頂棚及板壁的墻角處和墻與地面、墻與吊頂采用圓弧陰陽過渡并封閉。所有配套鋁合金型材均采用優(yōu)質(zhì)電泳型材,以防止實(shí)驗(yàn)室以后消毒時(shí)導(dǎo)致鋁材氧化。
3.4干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室照明燈具
實(shí)驗(yàn)室照明均采用專用潔凈室照明燈具(不銹鋼斜邊型吸頂式帶罩密封燈具)。特點(diǎn):鏡面全內(nèi)膽,照明度強(qiáng),不銹鋼邊框年久不腐蝕,外形美觀,密封好、抗干擾、不積塵、易清潔。
3.5干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室消毒
    實(shí)驗(yàn)室消毒采用紫外線燈照射消毒
3.6干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室氣流組織方式
從節(jié)能角度考慮實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)設(shè)計(jì)為新風(fēng)+回風(fēng)混合系統(tǒng),采用頂送側(cè)下回的氣流組織方式。
3.7干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室空調(diào)系統(tǒng)工程
萬級(jí)無菌實(shí)驗(yàn)室采用風(fēng)冷直接膨脹式凈化專用風(fēng)管型空調(diào)機(jī)組,滿足實(shí)驗(yàn)室夏季、冬季冷熱負(fù)荷,保持實(shí)驗(yàn)室恒溫恒濕。
3.8干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室防氣流倒灌系統(tǒng)
實(shí)驗(yàn)室新風(fēng)管上均安裝電動(dòng)密閉閥以防止關(guān)機(jī)時(shí)空氣回流。并能封閉消毒。
 
干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面圖
    以8m*13m的大小面積為例,建立的干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室平面圖。
 
干細(xì)胞培育室平面布局 圖
 
科瓦特細(xì)胞培養(yǎng)室建設(shè)方案
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